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廣州雙螺旋基因技術(shù)有限公司

恒溫?zé)晒釶CR儀其技術(shù)原理介紹

時(shí)間：2026-1-23閱讀：144
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　　恒溫?zé)晒釶CR儀是一種結(jié)合恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)與熒光檢測(cè)技術(shù)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備，能夠在恒定溫度下對(duì)DNA或RNA進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的擴(kuò)增和定量檢測(cè)。
 
　　恒溫?zé)晒釶CR儀其技術(shù)原理介紹：
 
　　恒溫?cái)U(kuò)增：
 
　　無(wú)需傳統(tǒng)PCR的溫度循環(huán)(變性、退火、延伸)，通過(guò)特定酶系統(tǒng)(如Bst DNA聚合酶)和引物設(shè)計(jì)，在單一溫度(通常為60-65℃)下完成核酸的持續(xù)復(fù)制。
 
　　常見(jiàn)技術(shù)包括LAMP(環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增)、RPA(重組酶聚合酶擴(kuò)增)、NASBA(依賴(lài)核酸序列的擴(kuò)增)等。
 
　　熒光檢測(cè)：
 
　　熒光染料嵌入法：如SYBR Green I等染料可嵌入雙鏈DNA的凹槽中，熒光強(qiáng)度與雙鏈DNA總量正相關(guān)，間接反映擴(kuò)增產(chǎn)物的積累。
 
　　熒光探針?lè)ǎ喝鏣aqMan探針、分子信標(biāo)等，探針兩端分別連接熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)。擴(kuò)增過(guò)程中，探針與模板結(jié)合后被切割或構(gòu)象變化，熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，釋放熒光信號(hào)。
 
　　數(shù)據(jù)采集與分析：
 
　　熒光信號(hào)被檢測(cè)器捕獲并轉(zhuǎn)化為熒光值，根據(jù)熒光值的變化定量測(cè)定DNA的含量和擴(kuò)增情況。
 
　　軟件自動(dòng)計(jì)算閾值(threshold)，當(dāng)熒光信號(hào)超過(guò)閾值時(shí)，記錄對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增時(shí)間(Tt值或Ct值的恒溫替代指標(biāo))，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)推算樣本中靶標(biāo)的初始濃度。

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